Определение фибриногена, (кровь) – цены, норма, расшифровка, подготовка, противопоказания

ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

Принцип метода. Заключается в определении времени свертывания разбавленной цитратной плазмы избытком тромбина. Время свертывания при этом пропорционально концентрации фибриногена, которую определяют по калибровочному графику.

1. Тромбин (лиофильно высушенный реагент, 150 ед. NIH)  –  2 фл.

2. Растворитель для тромбина, 3,5 мл  – 1 фл.

3. Стандарт-плазма с известным содержанием фибриногена (лиофильно высушенная)  – 1 фл.

4. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М),  5 мл  – 1 фл.

1. Тромбин (лиофильно высушенный реагент, 500 ед. NIH)  –  2 фл.

2. Растворитель для тромбина, 10,5 мл  – 1 фл.

3. Стандарт-плазма с известным содержанием фибриногена (лиофильно высушеная)  – 1 фл.

4. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М),  10 мл  – 1 фл.

Линейность определения – в диапазоне от 1,0 до 6,0 г/л (без дополнительных разведений плазмы).

Коэффициент вариации результатов определения концентрации фибриногена не превышает 10%.

Допустимый разброс результатов определения концентрации фибриногена в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%.

Показания для анализа

  1. Исследование свертывающей системы крови. 
  2. Кровотечения любой этиологии. 
  3. Склонность к повышенному тромбообразованию. 
  4. Заболевания сердечно-сосудистой системы – инфаркт миокарда, атеросклеротическое поражение артерий, ишемическая болезнь сердца. 
  5. Беременность. 
  6. Патология печени. 
  7. Подготовка к плановой хирургической операции. 
  8. Инфекционно-воспалительные заболевания, в том числе сепсис. 

Референсные значения и интерпретация результатов

Обычно время свертывания разведенной исследуемой плазмы составляет 4-40 с. По калибровочной кривой находят концентрацию фибриногена в исследуемом образце  (в диапазоне 0,7-6,0 г/л для оптических коагулометров и 0,9-6,0 г/л для коагулометров, работающих на механическом принципе).

Для коагулометра CGL 2110 фирмы СОЛАР (Беларусь) диапазон измеряемых концентраций фибриногена в связи с конструктивными особенностями прибора составляет 1,2-5,0 г/л.

Определение фибриногена в крови.

При определении концентрации фибриногена (в разведении плазмы 1 9), близкой к крайним значениям измеряемого диапазона (более 6,0 г/л или менее 0,9 г/л), рекомендуется повторить анализ с другим разведением исследуемого образца плазмы (соответственно 1 19 или 1 4).

Согласно национальному руководству по лабораторной диагностике нормальным уровнем фибриногена считается 1,8-3,5 г/л (грамм на литр). Ввиду допустимой погрешности методов исследования, в большинстве лабораторий референсным диапазоном считается уровень 2-4 г/л.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Все реагенты, входящие в набор, используются только для применения in vitro.

Все компоненты набора в используемых концентрациях не токсичны.

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Особенности данного анализа

Повышение уровня фибриногена является независимым фактором риска развития осложнений заболеваний сердечно-сосудистой системы – инфаркта, инсульта, эмболии артерий конечностей. 

Фибриноген является неотъемлемым компонентом первичного гемостазиологического скрининга. Одновременно с ним целесообразно определять АЧТВ, протромбиновое время (ПТИ), МНО, количество тромбоцитов. По результатам скрининговых тестов определяются показания для анализа развернутой коагулограммы.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

·      Центрифуга;

·      Коагулометр любого типа;

·      Дозатор пипеточный на 0,1 мл – 1,0 мл;

·      Пробирки стеклянные;

·      Цилиндр мерный вместимостью 200 мл;

·      Вода дистиллированная;

·      Перчатки резиновые хирургические.

1. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ К РАБОТЕ

Содержимое одного флакона с концентрированным буфером трис-НСI перенести в мерный цилиндр и довести объем дистиллированной водой до 100 или 200 мл[1]. В результате получают рабочий раствор буфера.

В один флакон с тромбином внести (точно!) 1,5 или 5,0 мл растворителя для тромбина (см. сноску внизу) и растворить содержимое при комнатной температуре ( 18… 25оС) и энергичном покачивании в течение 2 мин. В результате получают раствор тромбина. Тромбин во втором флаконе разводят по необходимости.

Во флакон со стандарт-плазмой внести (точно!) 1,0 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре ( 18… 25оС) и слабом покачивании в течение 3 мин. В результате получают стандарт-плазму с концентрацией фибриногена 2,60 г/л.

Номер

раствора

Стандарт-плазма

и ее разведения (мл)

Буфер

( мл)

Разведение

Концентрация фибриногена, г/л

1

0,2 мл

0,8

1 : 5

5,20

2

0,5 мл раствора 1

0,5

1 : 10

2,60

3

0,5 мл раствора 2

0,5

1 : 20

1,30

4

0,5 мл раствора 3

0,2

1 : 28

0,92

Примечание: для оптико-механического коагулометра CGL 2110 фирмы СОЛАР (Беларусь) раствор № 4 не применяется.

ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ

·      Центрифуга;

Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата натрия), соотношение объемов крови и цитрата натрия – 9:1.

Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, а отбор плазмы на исследование – сразу же после центрифугирования. Не допускается анализ плазмы, имеющей сгустки, гемолиз, избыток цитрата натрия и полученной более 2 ч назад, а также замороженной плазмы крови.

Перед проведением анализа плазма разводится буфером в 10 раз (0,2 мл плазмы 1,8 мл трис-буфера).

1. В кювету коагулометра внести 0,2 мл разведенной (см. раздел”Приготовление анализируемых образцов”) исследуемой плазмы.

2. Инкубировать при температуре 37оС 1 мин.[2]

3. В ту же кювету добавить 0,1 мл рабочего раствора тромбина, имеющего комнатную температуру ( 18… 25оС) и начать отсчет времени свертывания.

2. ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОЙ КРИВОЙ

1. В кювету коагулометра внести 0,2 мл раствора 1 (см. схему).

2. Инкубировать при температуре 37оС 1 мин.

4. Аналогично определить время свертывания со 2, 3 и 4 калибровочным раствором.

5. По полученным данным построить калибровочную кривую (см. рисунок), где по оси ординат отмечают время свертывания (с), а по оси абсцисс – концентрацию фибриногена (г/л) в соответствии с приготовленными разведениями.

Рис. Координатная сетка и пример построения калибровочной кривой.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Набор в разной комплектации рассчитан на проведение 30 или 100 определений  при расходе раствора тромбина по 0,1 мл на 1 анализ.

https://www.youtube.com/watch?v=https:accounts.google.comServiceLogin

Хранение набора должно проводиться при температуре 2… 8оС в течение всего срока годности набора (24 мес.). Допускается хранение при температуре до 25оС в течение 10 сут. Замораживание не допускается.

Время использования набора не должно превышать 1 неделю с момента вскрытия его компонентов.

Раствор тромбина можно хранить при температуре 2… 8оС не более 3 дней; не замораживать.

Растворитель для тромбина после вскрытия флакона можно хранить при температуре 2… 8оС не более 1 недели; не замораживать.

Стандарт-плазму после разведения можно хранить при комнатной температуре 18… 25оС не более 3 ч или не более 1 недели при температуре -16…-20оС.

Рабочий раствор буфера можно хранить при температуре 2… 8оС не более 1 мес.

https://www.youtube.com/watch?v=ytadvertise

Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. – М.: “Ньюдиамед-АО”, 2001. – 296 с.


[1] см. варианты комплектации набора реагентов «Тех-Фибриноген-тест»

[2] Инкубацию проводят в термостате коагулометра

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:

Отправить ответ

avatar
  Подписаться  
Уведомление о
Adblock detector